Foram685-2文检专用拉曼光谱仪应用技术要点

 

拉曼光谱仪的操作非常简单，能否收集到检材的拉曼光谱，需要根据不同的检材采取不同的测试条件，只要操作得当，比如采用不同的增强时间、激光输出能量、平均次数，精确选取取样点等措施，便可采集到清晰的拉曼光谱。操作仪器的具体步骤和技术要点概述如下：

 

1. 首先在使用设备之前，一定要先将主机开启并预热至少15分钟以上，以保证工作状态的稳定。

2. 使用工厂提供的校准定标样品聚丙乙烯（polystyrene），对仪器进行定标校准，使用20x物镜，通过图像导航系统找到清晰的激光斑点，

 

 增强时间设置成5秒

 平均次数1次

 激光输出能量100%

 

点击采集图谱图标λ，此时在荧光屏上应该出现清晰的拉曼光谱，通过点击菜单上的system calibrate frequency 选择polystyrene automatic,仪器会自动进行校准定标，如果参数standard deviation fit 小于15，说明定标成功。当然此数值愈小说明定标愈准确。如果使用自动定标方法以上参数总是大于15，则可使用手动定标方法。具体步骤如下：system calibrate frequency 选择polystyrene manual通

 过在清晰的拉曼光谱上点击5个特征峰值，完成定标过程，在完成以上基本操作以后，仪器便可投入正常使用

 

3. 为了保护检材，在收集拉曼光之前，一定先使用10%的激光能量，即最弱的激光输出。

4. SERRS是FOSTER+FREEMAN 公司的专利产品，它在收集拉曼光谱的过程中起者非常重要的作用，抑制荧光，增加检材内部分子的共振，提高拉曼光谱的强度。SERRS的保存条件非常重要，最佳的保存方法是：将试剂放置在工厂提供的保温瓶内，瓶内灌满水，然后将保温瓶放在冰箱的冷藏室内保存，储存温度4-6摄氏度,

5. SERRS由两瓶化学试剂构成，一瓶是透明的液体（POLY- L-LYSINE 0.01% SOLUTION），另一瓶是浑浊的液体（SILVER COLLOID）。在检材上涂SERRS时，建议先在检材上做标记，长度一般1毫米左右。使用点滴器，先吸取透明的液体POLY- L-LYSINE 0.01% SOLUTION涂抹在标记范围内，一定让它干透后，再更换取样头，吸取SILVER COLLOID，涂抹在POLY- L-LYSINE 0.01% SOLUTION上。（切忌在涂抹前两种试剂混杂。一定使用不同的取样头吸取不同的试剂），等待SILVER COLLOID干透之后方可进行采样。

6. 涂抹SERRS试剂的量无需很多，每一种点一滴即可。太多的试剂对于收集拉曼光谱意义不大。

7. 调整载物台的高度，使图像聚焦，以便在荧光屏上得到清晰的图像。通过5x物镜定位选取的笔画。10x或20x用于精确寻找取样点。采集拉曼光谱时建议使用20x物镜。

8. 先将增强时间(integration time)设置成1秒，平均次数1次，激光输出能量选择15%，观察拉曼光谱的形态，如果拉曼光谱能够出现，但幅度较低，可适当增加增强时间或将激光输出能量增至25%（100%的激光输出尽量避免使用），如果基线噪音（曲线上的毛刺）较多，可采取增加平均次数的方法降噪。如果拉曼光谱很强，已经出现在纵坐标的顶部成一条直线，可将增强时间缩短至1秒以内，如0.5甚至0.2秒，直到采集到清新的拉曼光谱曲线。在采集拉曼光谱时，一定在不同的位置多选取取样点采集，并观察图谱的重复性和稳定性。

 

9. 圆珠笔油、签字笔在涂抹上SERRS之后，会得到非常清晰的拉曼光谱，一般增强时间选1秒，平均次数1次，激光输出能量10%或25%。

 

10. 对于碳素墨水、激光打印机碳粉、复印机碳粉等含碳成分很高的检材，应先涂抹SERRS，在收集拉曼光时，图象增强时间应增加到10秒种以上，平均次数10次。有时甚至需要20、30秒，激光输出能量选择15%，因为此种类型的检材含有较多的碳，而碳对激光的吸收非常强烈，导致拉曼散射光很微弱，选用较长的增强时间可收集到较强的拉曼散射光。在收集此类检材的拉曼频谱时，经常会出现如下的情况，即：在某些点可以收集到拉曼频谱，而在其它点却收集不到，这并非是仪器的重复性有问题，而是碳粉分布的不均匀造成，这时应在多个点进行收集观察，以确保测量的可靠性。

 

11. 对于其他不同类型的检材，如印泥、印油、纸张上的附着物质、微量物证等只要调整不同的参数条件（印泥、印油一般都有荧光，需要涂SERRS），都可以获得清晰的拉曼光谱。