上海翻译公司完成医学类抗菌效果研究中文翻译

原作

N．Arweiler、E. Schwartzkopff、F.Hase、A.Sculean、T.M.Auschill

关于香野洁露植物性牙膏为期4天的牙菌层形成的抗菌效果研究

 

 

在对香野洁露进行为期4天的牙菌层形成研究中，对比控制性牙膏和盐酸氯己定-漱口溶液，对香野洁露的抗菌效果进行检查。盐酸氯己定对于牙菌层的形成以及细菌活性具有抑制作用，因此在所有参数中的显示值最低。两种牙膏（香野洁露和控制性牙膏）显示出相似的牙菌层-指数，且均高于使用盐酸氯己定时的数值。与控制性牙膏相比，使用香野洁露时，前面牙齿的牙菌层覆盖面积百分比率明显下降，数值与使用盐酸氯己定牙膏时产生的值相似。相对于控制性牙膏而言，使用香野洁露的细菌活性在24小时之后呈中性，但在96小时之后活性开始明显下降。

关键词：口腔卫生、牙齿生物膜、牙膏、临床试验、盐酸氯己定

                                                                                                                    N．Arweiler 等：

关于香野洁露植物性牙膏为期4天的牙菌层形成的抗菌效果研究

 

1.引言

在欧洲，人们将牙齿的日常清洁工作，视为牙齿保健的有效措施[12]。从实质上讲，只能将牙膏作为有效成分的一个理想化运送基地，例如，具有抗菌效果的物质或氟化物。应该将牙膏作为预防龋齿以及牙龈疾病的有效措施。

氟化物的特性表明，只有在特定的条件下才会具有一定的抗菌效果，同时对牙齿珐琅质的再矿化也具有重要的意义。在多年的临床实践中已经证实，氟化物在预防龋齿方面具有重要意义。已确定的抗菌物质，如盐酸氯、金属离子、挥发油或三氯生会抑制牙菌层的繁殖，从而可以预防齿龈炎以及龋齿的发生[8、10、13、17]。

   早在1889年，Miller就建议使用具有抗菌效果且含有酚醛物质的漱口药水，治疗牙龈感染。酚类化合物，如麝香草酚、桉叶素以及薄荷醇，均为含有挥发油有效成分的物质。至今，仍有许多口腔卫生产品中含有该成分。含有挥发油成分的漱口水溶液Listerine以及Salviathymol N都为知名的商业产品。香野洁露是一种与Salviathymol N相似的牙膏。自1973年起，在德国市场上就已经开始出售，其中含有不同的植物挥发油成分，如鼠尾草油、茴香油、胡椒薄荷油、薄荷油以及丁香油酚和百里香酚。自1990年起，变异的香野洁露就开始在市场上出售，到目前为止已大概售出7百万包，除了含有相同的有效成分之外，还额外添加了1000ppm的氟化物（钠单氟磷酸盐），从而起到再矿化效果以及龋齿防护的作用。利用RDA的最低值30（牙质的相对磨损），能够对易磨损的牙质进行温和的清洁。

   对于口腔保健产品中现存的单独或不同种类的有效成分的功效尚不明确，因此，应在临床体内条件下，对混合成分的牙膏或漱口水中挥发油的功效进行检验[1]。当前的工作目标是，将为期4天的牙菌层形成试样与控制性牙膏及阳性控制（盐酸氯-漱口水溶液）进行比较，从而研究香野洁露牙膏的临床及抗菌效果。

 

2. 材料及方法

根据弗莱堡大学独立的伦理学委员会、受检者保险的标准，以及根据赫尔辛基宣言，将该项研究分为3-支，交叉进行。18名受检者参加了该项研究（13名女性以及5名男性，年龄为24.9+1.81），在清洗阶段的3个测试周期，18名受检者同时使用牙膏及盐酸氯己定-漱口水，确保每位受检者都能使用到牙膏及盐酸氯己定-漱口水。

   利用4-天-牙菌层形成试样[1、2、3、4、5]内部的牙菌层上面的悬浮体，对牙膏的功效进行检验。同时，将4天中所使用的产品，作为口腔卫生保健的唯一措施。在测试阶段，不允许实施其他的口腔清洁措施。根据制造商的说明书，使用（未稀释）盐酸氯清洗溶液。

 

2.1 测试产品

测试的两种牙膏以及用于卫生保健阶段的牙膏，均由位于科隆市的Madaus公司生产。将所有牙膏注入外观相同，75毫升的白色软管中。用中性的白色标签替换盐酸氯己定瓶子的原始标签。根据指定的随机图，分配测试产品，同时记下受检者编号及测试周（例如，14-3：受检者14，测试周3）。对以下产品进行研究：

·香野洁露牙膏单氟磷酸钠（1000pm 氟化物）、鼠尾草油、茴香油、胡椒薄荷油、绿薄荷油、丁香油酚、百里香酚以及 甜没药（香野洁露，科隆市Madaus有限公司）

·控制性牙膏中，不含上述提及的有效成分和氟化物（科隆市Madaus有限公司）

·阳性控制、盐酸氯己定（含有酒精，盐酸氯己定-葡萄糖酸0.2%，布尔市葛兰素史克公司） 

 

2.2 实施

根据以往的病历，在得到受检者的书面信息以及患者签名同意之后，对所有测试参与者进行专业的牙齿清洁。受检者会得到一管标准的牙膏（检验牙膏，科隆市Madaus有限公司）和一支牙刷（板形-凹陷医疗设备，宝洁公司），在为时一周的卫生保健阶段和清洗阶段使用。在图表1中，会对该项研究的设计内容进行大致地描述。

每个测试阶段（0天）开始时，要对牙齿进行重新的清洗（牙菌层-参数=0）按照随机目录分发测试产品，在接下来的4天里，不可以对受检者实施口腔卫生保健措施，同时，每天使用悬浮液体牙膏清洗牙齿1分钟和30秒10毫升的阳性检查，替代各两次（早，晚）的清洗。起初清洗时，要参照说明书进行。接下来的使用过程中，将由受检者在家中自行完成悬浮液的制备。在制作牙膏悬浮液时，受检者需要在每个测试周开始时，准备8支一次性注射器，每支注入3克牙膏。在密封杯中，加入10毫升的水并与牙膏混合，从而形成测试所需的悬浮液。在测试阶段，禁止食用丝状物和口香糖。

  每个测试阶段（周一至周五）之后，接着进行一个为期10天的清洗阶段，在此期间使用最初分发给受检者的标准牙膏，对牙齿进行清理。在清洗阶段，可以对牙齿的齿缝进行清理。之后，进行其他两个相似的测试周期。

   在研究的最后一天，对全部受检者进行专业的牙齿清洗，同时给牙齿添加氟化物。

 

2.3 临床研究

在研究的第1天和第4天（24小时和96小时之后，牙菌层的生长过程）探访牙科医院的受检者，根据Silness & Löe[22],确定牙菌层-指数[P]1(第1天)和PI2（第4天）。第1天时，位于17-14和47-44的牙齿以及第4天时，位于24-27和34-37的牙齿PI值会增长。在第4天时，根据四碘荧光素数码影像的颜色，以及图像计算程序（KS 300，Zeiss），能够确定前面牙齿上部及下部的牙菌层覆盖面积（PA）的百分比。在每个测试周开始时，确定所有牙齿的凸起部位-流血-指数（PBI）[21]，以便于对每个测试周期的齿龈状态进行检查与记录。

 

2.4 微生物研究

使用一根牙科探针（EXS9，Hu-Friedy，美国），在测试的第1天和第4天，分别在第16颗与46颗（VF1），第26颗与36颗（VF2）牙齿的口腔表面，提取龈上的牙菌层试样。将试样涂抹在显微镜玻片上，借助荧光技术，使用二乙酸荧光素和溴化乙啶[3、4、5] 两种颜料，对试样进行着色。最后，打开盖片，将试样放置于显微镜（偏光显微镜 2plus，Fa. Carl Zeiss，哥廷根市）的下面。借助数码相机（偏光相机 HRc，Fa. Carl Zeiss，哥廷根市）,保存4张牙菌层试样不同区域的数码图像。借助上文提到的图像分析程序（KS 300，Fa. Carl Zeiss，哥廷根市），确定牙菌层试样的活性（用%表示），用绿色（活菌）和红色（死菌）区分细菌的活性。图表2为生物膜细菌在显微镜下的代表性图像，利用荧光技术对其着色。

 

2.5 统计结果

借助计算机程序“社会科学统计软件/SPSS 16.0”（PI1、PI2、VF1、VF2、PA），确定单个产品指数的平均数。通过Kolmogorov-Smirnov测试，检查指数的正态分布。通过AVOVA测试（变量分析），能够发现产品之间的明显差异同时正常分布典型数据，可将针对单个试样的组合t-测试，用于控制性牙膏与活性标本（学生t-测试）之间的统计学比较。

由于为期10天的清洗阶段与交叉设计[18]的随机分布，传导效果可能会被排除,进而不能进行Bonferroni校正。

 

3. 结果

在未发现副作用的情况下，结束对所有受检者的研究，在每个测试周期的初期，凸起部位-流血-指数几乎是相同的，因此会发布相同的牙龈条件（表1）。

   图表3-5显示出的特殊参数结果，同时说明与控制性牙膏相似的统计对比（***:P<0.001;*:P<0.01;n.s.:不显著）。

   与控制性牙膏相比，香野洁露植物性牙膏在第1天时的牙菌层-指数（0%）和在第4天时的牙菌层-指数（3.5%），只有少量的下降，然而，前面牙齿的牙菌层覆盖面积明显地缩减到52%（P<0.001;***），几乎达到了氯己定所需的值（图表6）。

   科隆，德国医生出版社   口腔预防&儿童牙科学 31（2009）4                                                                         151

 

 

N.Arweiler等：

关于香野洁露植物性牙膏为期4天的牙菌层形成的抗菌效果研究

 

   ：香野洁露植物性牙膏   ：检查   ：不显著

图表5   24小时和96小时之后的细菌活性。

   牙菌层内部的细菌活性，在第1天时，降低了5.4%（与控制性牙膏相比）。在接下来的研究时间里，牙菌层内部的细菌活性明显下降了21%（p<0.05;*）。

   与控制性牙膏相比，氯己定显示的所有参数的预期值（PI：53%和69%，PA：53%，VF 28%和40%；所有p<0.001;***）都出现了下降。

   在表2中，对研究末期提出的特殊调查表的结果进行了描述。

 

4. 讨论

针对于检测牙膏内部活性物质成分的多项研究，已经不再依赖于机械的净化作用[1、2、3、9、14、15]。将牙膏与水混合（悬浮液体），在对口腔内正常的清理时，对活性物质作用进行简单的清洗分解，同时排除机械的净化作用。当前的研究中，共使用了3克的牙膏[1,2]。与正常的使用量相比，该用量超出了1.45克[11]。通过对牙膏的稀释，口腔中悬浮液体的浓度与唾液相似。

   由于牙膏成分复杂以及辅助材料的潜在作用，例如，用于阴性对比的阴离子洗涤剂（水或安慰剂牙膏）即讨论组[1,2]，在与控制性牙膏的下降值做比较时，可能会影响结果的准确性。在当前的研究中，使用不含添加剂（挥发油）及氟化物的控制性牙膏，排除药物的稳定因素，控制性牙膏中含有具有自然抗菌效果的防腐剂。在科学研究中已经证实，氧化苯酸防腐剂对于牙菌层细菌有显著的抑制作用，能够抑制体外和体内的细菌生成碳水化合物代谢发酵酶 [6、16、19]。之后根据相同的研究计划，对特别工作组的研究数据进行比较，发现氯己定的值均相同，但该处控制性牙膏的数据值低于其他研究中的数据值[7]。

 

关于香野洁露植物性牙膏为期4天的牙菌层形成的抗菌效果研究

    0天（1周期）  0天（2周期）  0天（3周期）

表1   第3周期开始时，中间凸起部位-流血-指数（±标准偏差）。

   ：数目名称  ：香野洁露植物性牙膏  ：控制性牙膏  ：牙膏悬浮液的味道  ：舒适  ：不舒适  ：辛辣  ：温和  ：苦  ：清新感  ：有  ：无  ：味觉变化  ：清洗后的灼热感  ：在第4天时，能够感觉到的牙菌层沉淀物  ：牙齿颜色变化

表2   受检者调查表（问题1允许有多个答案 ）。

可以清晰地对活性值进行观察。使用含有水、安慰剂溶液或无效成分的控制性牙膏，在工作组研究中，显示出的细菌活性值为70-90%[3,4,5,6,7]。在文献中，这类数值经常代表标准牙菌层/口腔菌落的活性程度，通过与其他的或常规的细菌培养方法采集这些数据。在当前的研究中，得出控制性牙膏的活性值在53%-57%之间，未处理的牙菌层数值出现明显的下降。由于该牙膏不含特别的安慰剂膏和阴性控制。在此情况下，对比控制性牙膏的数据，牙菌层的形成及其活性可以得到抑制，控制性牙膏自身会产生较好的效果和相对较低的值。通过测试阶段，牙菌层活性值从70-90%降低至50-53%，抗菌作用显著。

   很难对侧面牙齿的牙菌层-指数值与前面牙齿的牙菌层面积值之间的差异进行描述。原则上，测量牙菌层生长的两个参数，测得的牙菌层覆盖面积的精确参数，该数据的差额为0-100%，不属于所分的4种类别（0-3）。牙菌层-指数降低时。但在特别工作组的全部研究中，牙菌层-指数以及牙菌层表面积的数值下降幅度相似[3、4、5、6]。在当前的研究中，通过使用香野洁露植物性牙膏，第4天时的牙菌层-指数与牙菌层覆盖面积之间的下降幅度存在很大的差距（3.5相对应的为53%）。通过清洗作用或侧面和前面牙齿之间的区别，并不能将该现象解释清楚。

 

N.Arweiler等：

关于香野洁露植物性牙膏为期4天的牙菌层形成的抗菌效果研究

 

 

因为在比较氯己定与控制性牙膏时，这两个参数之间存在着相互制约的关系。PA数据记录在已制作的临床图表中，之后出现的牙菌层-指数的文件资料会重复出现。由于香野洁露植物性牙膏的功效（图表6）。在控制性牙膏的逐渐变化的牙菌层-指数（例如，必须在级别1与级别2之间确定）选择偏高的数值，因此低估了香野洁露植物性牙膏对于牙菌层的抑制作用。

   在确认调查表的数据之后，即使主观上认为香野洁露植物性牙膏具有很好的功效，但功效大小排序依然为氯己定>香野洁露植物性牙膏>控制性牙膏。

跟预期的一样，使用盐酸氯己定的14为受检者的牙齿上没有牙菌层沉积物，在4位受检者的牙齿上含有中等程度的牙菌层沉积物。通过使用香野洁露植物性牙膏清洗牙齿之后，其中5位受检者的牙齿上无明显的牙菌层沉积物，8位受检者的牙齿上有中等程度的牙菌层沉积物，5位受检者的牙齿上有较多的牙菌层沉积物。与此相对应的控制组中，有8位受检者的牙齿上有中等程度的牙菌层沉积物，10位受检者的牙齿上有较多的牙菌层沉积物。

   （阴性）控制阶段结束4天后，香野洁露植物性牙膏的临床参数“牙菌层覆盖面积的百分比”以及“细菌活性”出现明显的下降。根据盐酸氯己定阳性控制的对比数据和早期相同设计的研究可以得出，控制性牙膏中的防腐剂具有一定抗菌的作用，因此，在功效上无法清楚的分辨出测试牙膏与控制性牙膏之间的差异。